食品中沙门氏菌和志贺氏菌检测能力验证的分离鉴定报告

摘要：目的：通过样品的分离鉴定过程进行分析，总结经验。方法：按指导书要求，根据标准GB4789.4 2010和GB4789.5 2012，仪器为ATB。结果：成功分离出目标菌沙门氏菌和志贺氏菌，鉴定出干扰菌致泻大肠埃希氏菌。结论：同时分离鉴定3种菌株，可以直观地对比出3种菌株在不同的培养基中的菌落形态，以及如何准确有效地鉴定目标菌，是一个很好的经验积累，并顺利完成此次能力验证。

关键词：能力验证；沙门氏菌；志贺氏菌；大肠埃希氏菌 文献标识码：A 中图分类号：TS201

文章编号：2096-4137（2018）10-022-03 DOI：10.13535/j.cnki.10-1507/n.2018.10.07

沙門氏菌（Salmonella spp.）、志贺氏菌（Shigella）、致泻大肠埃希氏菌均为肠道致病菌，革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌有2489个不同的血清型；志贺氏菌主要有福氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌；致泻大肠埃细菌中公认的致病菌有6种，而在实际检测过程中，按标准要求，只需要符合相关典型的生化特性以及多价血清凝集反应鉴定到属，就可以判断为检出或未检出。本文根据笔者多年的微生物检测经验，通过总结本次能力验证分离鉴定过程，积累经验，以提高检测能力水平。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 待测样品

食品中沙门氏菌和志贺氏菌能力验证样品，编码为110-1～110-4共4个样品，为乳白色块状固体物，西林瓶真空密闭包装，由广东省疾病预防控制中心提供。

1.1.2 培养基及试剂

一次性成品培养基-缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫酸钠煌绿增菌液（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、XLD 琼脂平板、沙门氏菌生化鉴定盒、志贺氏菌生化鉴定盒、营养琼脂（NA）、沙门氏菌显色培养基（SA）、志贺氏菌显色培养基，商品粉末培养基-亚硫酸铋琼脂（BS）、志贺氏增菌肉汤沙门氏菌属多价诊断血清（O，H1，H2，H3，H4）、志贺菌属多价诊断血清（泰国）、厌氧包（日本）均购自广东环凯微生物有限公司；ATB全自动微生物鉴定系统配套试剂条（ID32E）为生物梅里埃产品。

1.1.3 主要仪器

ClassⅡBSC生物安全柜（新加坡 ESCO）、生化培养箱（迅搏科技）、高压灭菌锅（迅搏科技）ClassⅡBSC生物安全柜（新加坡ESCO）、生物显微镜（奥林巴斯Olympus ZEISS）、ATB全自动微生物鉴定/药敏分析系统（法国生物梅里埃公司）、移液器（德国EPPENDORF）。

1.1.4 标准菌株

伤寒沙门氏菌，福氏志贺氏菌。

2.2 检测方法

2.2.1 样品处理

按照作业指导书，无菌打开真空冻干管，用4ml1营养肉汤充分溶解转移冻干管的内容物作为待测溶液为样品。按照GB4789.4-2010 食品国家安全标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验和GB4789.5-2012食品国家安全标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验，及后来分离出的大肠埃希氏菌用到的标准GB 4789.38-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数内的生化鉴定。沙门氏菌与志贺氏菌标准菌株按实验步骤同步进行，并且做空白对照

1.2.2 增菌

（1）前增菌。每个样品各吸1ml至9ml增菌液中，沙门氏菌检验用缓冲蛋白胨水BPW，混匀后36℃±1℃培养18h，志贺氏菌检测用志贺氏增菌肉汤，混浑后于41.5℃±1℃厌氧培养18h。为了确保检测的准确性，每个样品做2个平行样进行检测。

（2）选择性增菌。沙门氏菌检测有需要选择性增菌，轻轻摇动培养过的样品混合物，无菌移取1mL，转钟与成品培养基TTB内42℃±1℃培养24h；同时另取1mL，转钟于成品培养基SC内，36℃±1℃培养24h。

1.2.3 分离培养

沙门氏菌检验，每个增菌液接种XLD、BS、科马嘉显色培养基，36℃±1℃培养24～48h；志贺氏菌检验，每个增菌液接种XLD、麦康凯、志贺氏菌显色培养基，36℃±1℃培养24～48h。

增菌分离培养情况见表1。

1.2.4 生化鉴定和血清凝集实验

分别用环凯的沙门氏菌生化鉴定盒和志贺氏菌生化鉴定盒，以及梅里埃的ATB生化试剂条ID32E对可疑菌落进行生化鉴定鉴定。

沙门氏菌检测的生化鉴定，可疑的菌落为101-1，ATB检测结果为沙门氏菌属，伤寒沙门氏菌血清凝集试验O、H1凝集，101-1血清凝集试验O、H2凝集。志贺氏菌检验生化鉴定，可疑的菌落为101-3，其生化鉴定结果及血清凝集试验结果见表2，ATB检测结为志贺菌属，福氏志贺氏菌和101-3志贺多价血清凝集。对分离出的非目标菌生化鉴定见表2，ATB检测结果为致泻大肠埃希菌。

生化鉴定情况见表2。

2 结果与分析

2.1 分离培养

48h通过志贺氏菌检测分离出的菌落形态，就可以初步判断，1号样品是典型的沙门氏菌，2号样品是空白，3号样品是沙门氏菌，4号样品是大肠埃希氏菌。

2.2 判定

由表1和表2就可以得出结论。检测结果为110-1检出沙门氏菌，110-2无菌，110-3检出志贺氏菌，110-4检出大肠埃希氏菌。结论与能力验证预设一致，结果评价为满意。

3 讨论

（1）本次能力验证目标菌种2个，干扰菌1个，均为1个样品1个菌株，没有混合样品，在分离鉴定的过程中相对独立，没有干扰性，不存在因增菌时间过长使目标菌被优势菌覆盖的可能性。

（2）本次能力验证的菌株为具有典型性状的标准菌株，实验室可留作工作菌株使用。

（3）本次能力验证证明，一个样品在不同的检测中都能分离出相同的目标菌，因此在日常的检测工作中，沙门氏菌检测与志贺氏菌检测可相互验证。

（4）本次选择的沙门氏菌标准菌株与目标菌株不同，因此依据标准来判断。

参考文献

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（责任编辑：陈玉荣）