骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO,融合基因的相关性分析
【摘要】 目的:分析骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO融合基因的关系。方法:对32例急性粒细胞性白血病患者进行AML1/ETO 融合基因检测,并比较分析检出率。结果:本组32例AML1/ETO 融合基因阳性22例,总检出率为68.75%,其中M2b型患者AML1/ETO 融合基因检出率达95.0%,显著高于其他分型(P<0.01)。结论:骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO 融合基因的关系在某一分型上表现为较高的相关性,但特异性较低。
【关键词】 白血病; 细胞形态; AML1/ETO融合基因; 相关性
急性髓系白血病(AML)是临床上常见的恶性造血系统疾病,传统的诊断分型标准主要依赖于骨髓穿刺涂片镜检,对检验师要求较高。随着分子生物学的研究日益深入,发现AML患者存在遗传基因的变异,因此建议将基因检测纳入AML的诊断标准中[1]。笔者对38例AML患者进行骨髓白血病细胞形态和AML1/ETO 融合基因检测,旨在探讨其相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料 以本院2010年1月-2012年8月血液科32例AML患者为研究对象,男20例,女12例,年龄12~67岁,平均(41.72±6.42)岁,病程1~11年,平均(5.24±2.56)年。所有患者均排除心、肝、脑、肾等严重并发症及血友病等骨髓穿刺禁忌证。
1.2 检测方法
1.2.1 骨髓白血病细胞形态 于髂后上棘抽取骨髓液涂片,常规细胞化学染色,光学显微镜观察骨髓细胞形态,并计数。根据细胞大小的一致性、核浆比例的多少、核染质的性状等进行初步筛选;应用氧化物酶(POX)(天津市生命科学应用研究所生产)和过碘酸- 雪夫染色(PAS)染色(试剂由北京雷根生物技术有限公司提供)进行确证,经过非特异性脂酶+氟化钠抑制实验(α-NAE+NaF)、中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)进行鉴别,最后依据FAB协作组AML的形态学诊断标准进行分型[2]。
1.2.2 AML1/ETO 融合基因检测 抽取骨髓1~2 ml用肝素抗凝,采用美国雅培公司双融合AML1/ETO探针,光谱橘红直接标记ETO和光谱绿色直接标记AMI,离心,去上清液,加入0.075MKCL静置30 min,加入固定液1 ml混匀离心,去上清液,重复2~3次后,滴片,按操作说明书制备样品,用配有DAPI/FITC/TRITC三色激发块的O-lympus BX51 荧光显微镜检查杂交信号,用Olympus PM30 显微照相机进行照相,每个样本观察500个间期细胞。
1.3 统计学处理 统计不同AML分型患者AML1/ETO融合基因检出率。统计学处理采用SPSS 11.5软件,计数资料采用 字2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 本组32例AML患者中,M1型3例,M2a型2例,M2b型20例,M4型3例,M5型4例。
2.2 本组32例AML患者共检出AML1/ETO融合基因阳性22例,总检出率为68.75%。
2.3 各型AML患者AML1/ETO融合基因以M2b型检出率最高,达95%,显著高于其他分型(P<0.01),见表1。
3 讨论
急性髓系白血病(AML)中最常见t(8;21)(q22;q22)易位所涉及的野生型AML1/ETO基因对维持正常造血至关重要,而易位所产生的AML1/ETO 融合基因则干扰正常造血细胞增殖与分化,并诱导白血病发生,同时也为诊断及治疗含有该融合基因的白血病提供了靶点。急性髓系白血病(AML)中最常见的t(8;21)(q22;q22)使21号染色体上的AML1 基因与8号染色体上的ETO 基因发生融合,形成AML1/ETO融合基因,产生一种嵌合蛋白,作为主要的抑制物改变了正常AML1-CBF(核结合因子)B这种与造血干细胞分化有关的转录复合物的生理功能,导致白血病的发生[3-5]。
吴学琼等[6]采用基于Taq-Man探针的RQ-PCR技术,以AML1/ETO融合基因为靶分子,定量监测15例AML患者初诊和随访时融合的表达水平,分析该基因表达水平的变化与临床特点的相关性,结论认为应用RQ-PCR技术对AML1/ETO融合基因进行定量监测,是判断和追踪该基因阳性的白血病患者疗效的良好指标,能较好地反映患者微小残留病的动态变化。笔者对32例AML患者骨髓涂片用瑞氏染色后,按照国内AML分型标准进行观察分析;进行荧光原位杂交技术(FISH)检测AML1/ETO 融合基因,结果显示:32例AML患者共检出AML1/ETO 融合基因阳性22例,总检出率为68.75%,其中M1型1例,M2a型1例,M2b型19例,M5型1例。其中以M2b型检出率最高,达95.0%,显著高于其他分型(P<0.01),提示AML1/ETO 融合基因与M2b型AML具有一定的相关性,由于本研究样本较小,无法确证其相关系数。
由于致病因素和发病机制的不同,导致AML患者白血病细胞抗原表达不一,临床鉴别复杂,特别是原本表达不一的抗原又缺乏特异性及敏感性,造成了对AML患者临床分型和处理意见缺乏统一的认识和指南。钟辉秀等[7]研究显示:113例AML中以髓系抗原CD13、CD33、cMPO、CD117的表达最常见,其次是HLADR、CD34 及CD71,其中以CD13、CD33 可在各型AML中表达最高,认为对AML与ALL的鉴别有重要意义。临床观察显示,M2b型AML患者骨髓常见原始细胞、早幼粒细胞和中幼粒细胞增生活跃,并以异常中幼粒细胞增多最为显著[8]。徐兵等[9]研究显示,CD19和CD56抗原在M2b型AML患者中检出率显著增高,但缺乏特异性,认为其原因可能与基因突变有关。朱守伟等[10]研究也证实,AML的疗效及预后受多方面因素影响,不能单纯依靠t(8;21)来评估疗效及预后。
综上所述,骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO 融合基因的关系在某一分型上表现为较高的相关性,但特异性较低。基因和遗传学诊断方法在AML分型诊断中仍有许多未知领域需要去不断研究证实。
参考文献
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[6] 吴学琼,孟力,田野,等.定量监测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值[J].华中科技大学学报(医学版),2011,40(2):218-220.
[7] 钟辉秀,殷明刚,杨新春.113例急性髓细胞白血病细胞形态学及免疫表型分析[J].重庆医科大学学报,2010,35(11):1761-1764.
[8] 刘斌,王光平.成人急性非淋巴细胞白血病M2型患者AML1/ETO融合基因mRNA表达及其临床意义[J].临床和实验医学杂志,2010,9(16):1206-1207.
[9] 徐兵,萧平难,宋小燕,等.急性髓细胞白血病患者CD56抗原表达与MDR1基因表达量的关系研究[J].中华微生物学和免疫学杂志,2009,5(12):1080-1083.
[10] 朱守伟,丁凯阳,徐修才,等.伴有t(8;21)急性髓细胞白血病的预后多因素分析[J].安徽医科大学学报,2012,47(2):203-206.
(收稿日期:2012-11-08) (本文编辑:陈丹云)
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