刍议姜黄素逆转肝癌多药耐药性与P—gp,ATP酶活性的关系研究

【摘要】姜黄素是目前受世界各国科学家非常关注的一个药物，也是世界各国花大量人力财力来开发和研究的一个药物。中国人从古代就开始使用中药姜黄来治疗各种疾病。本文主要从三个方面进行分析了姜黄素逆转肝癌多药耐药性与P-gp ATP酶活性的关系研究。

【关键词】姜黄素 肝癌多药耐药性 P-gp ATP酶活性 研究

一、姜黄素逆转肝癌多药耐药性与P-gp ATP酶活性的关系研究的重要意义

恶性肿瘤是危害人类健康最严重的一类疾病，寻找高效低毒的抗肿瘤药物对提高化学治疗水平具有重要意义。

姜黄素是从姜黄中提取的一种植物多酚，以往研究表明姜黄素具有多种药理活性，如抗炎、抗病毒、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等。据临床实践发现，姜黄素是有效的抗突变剂，也是抗促癌剂。以前的研究在姜黄素抗肿瘤转移方面侧重于对血道转移的肿瘤细胞的研究，但尚未见对小鼠腹水型肝癌细胞淋巴道转移影响的报道。本篇文章主要从姜黄素逆转肝癌多药耐药性与P-gpATP酶活性的关系研究进行了探讨分析，同时对姜黄素抗肿瘤作用机理进行初步的探讨。因此，此处研究既有理论意义，又有潜在的应用价值，同时也为开发价格低廉、高效低毒的天然抗肿瘤药物提供了可靠的理论依据。

二、姜黄素的主要功效以及药用价值

（1）姜黄素与癌症之间的关系。姜黄素可以有效治疗大多数癌症及其它炎性诱发的疾病。经调查研究发现，姜黄素能阻断结肠癌蛋白质一一皮层蛋白。皮层蛋白对于癌细胞运动是必需的蛋白质，它经常在癌症中过度表达，从而促使癌细胞转移到身体其他器官。姜黄素是姜黄的活性成分，已被科学研究用于许多类型癌症的治疗。

姜黄素已被证明具有癌化学预防作用，能扭转，抑制或阻止癌症发展的能力。新的研究发现了姜黄素阻止结肠癌细胞转移的机制之一。姜黄素与沙利度胺合璧杀死癌细胞。

（2）姜黄素与神经系统疾病的关系。姜黄素类似物可有效抵御阿尔兹海默氏症，能够防治帕金森氏病，姜黄素或可开发成治疗老年痴呆症药物。含姜黄素药物有助中风病患脑细胞再生，姜黄素有助延长寿命，利用姜黄发现延长寿命及控制老化的现象。

（3）姜黄素在临床实践中的药用价值。姜黄素也有重要的经济价值和广泛的药理作用：第一，姜黄素针对降血脂、抗氧化、抗发炎、抗动脉粥样硬化等具有显著的效果。第二，2004年时发现姜黄素能抑制HIV-1整合酶活性用于艾滋病的临床试验。第三，抗癌是姜黄素的主要药理活性之一，其抑制肿瘤的作用已在许多动物实验中得到反复证实，其具体抗癌机制已成为近期研究热点。

三、姜黄素联合FAP对于P-gp ATP酶活性的影响

研究姜黄素联合FAP对于P-gp ATP酶活性的影响，进一步探讨MJ联合FAP对肝癌多药耐药的逆转作用及其机制。该研究对进一步揭示肝癌发病的分子机制、设计合理的治疗药物及判断预后，提高我国肝癌的治疗水平具有重要意义。

（1）细胞株与动物。H22肝癌细胞株由本实验室保存，H22/FAP肝癌多药耐药细胞株由本实验室模拟临床FAP方案，采用药物ADR、CDDP、5-FU浓度梯度递增诱导法诱导而成。

（2） MTT法检测姜黄素、VER对H22/FAP的最大无毒剂量。抽取小鼠H22/FAP腹水瘤细胞，PBS洗2次，采用Ficoll -H ypaqie不连续密度梯度法，圆2000r/min，20min水平离心后收集Ficoll- Hypaqie液和細胞悬液间的肿瘤细胞。PBS洗1次，0.4%台盼蓝染色，计活细胞率（蓝染率

（3）耐药倍数的测定和计算。用MTT法测定肝癌H22/FAP细胞对ADR、CDDP、5-FU的耐药倍数。分别抽取H22肝癌敏感小鼠和H22/FAP肝癌多药耐药小鼠的腹水瘤细胞，按方法2处理制得H22和H22/FAP肿瘤细胞并培养细胞，然后依实验要求加入不同浓度测试药物ADR、CDDP、5-FU，另设不加药的空白对照组，继续培养48h后，加入MTT和DMSO，490nm和630nm双波长下测定吸光度（ OD），并计算耐药倍数。细胞生长抑制率%=（对照组吸光度平均值一加药组吸光度平均值）/对照组吸光度平均值×100%；求出IC50；RI=A/B，A为化疗药物对H22/FAP瘤细胞的IC50值；B为化疗药物对H22瘤细胞的IC50值。

（4）质膜的制备。BALB/c小鼠腹腔接种H22/FAP细胞（每只0.2ml，1×108/L），随机分成9组，每组10只：①NS组；②FAP+姜黄素（20mg/Kg）组；③FAP+姜黄素（10mg/Kg）组；④FAP+姜黄素（5mg/Kg）组；⑤FAP+姜黄素（2.5mg/Kg）组；⑥FAP+VER（ 3.Omg/Kg）组；（0FAP+ VER（1.5mg/Kg）组；⑧FAP+VER（o.75mg/Kg）组；⑨FAP+VER（0.375mg/Kg）组；尾静脉注射给药，FAP给药方案同“1.4”，7d后抽取腹水瘤，按照MTT法中的步骤制取肿瘤细胞，加入6ml裂解液，在4℃下孵育20min后，4000g下离心10min，收集上清，100000g下离心1h，取沉淀，加入含0.25mol/l蔗糖的裂解液，备用。

（5）P-gp ATP酶活性的测定。每只实验小鼠取20μg质膜，加入以下试剂（mmol/l）：Tris-HCL 50μl（ pH6.8），二硫苏糖醇2μl，Mgcl25μl，毒毛花苷圆2μl（清除Na+，K+-ATP酶活性），依他酸2μl（清除Ca2+- ATP酶活性），叠氮化钠5（清除线粒体ATP酶活性），然后加入Mg-ATP反应开始。加入Iml定磷试剂，37℃下反应30min，以分光光度计测定720nm下吸光度（OD）值。

四、结论

发现不同浓度姜黄素对p-gp ATP酶的活性有影响！到目前为止，体外实验研究证明姜黄素能逆转人类癌症耐药细胞多药耐药性，但对于逆转肝癌多药耐药的体内研究，尤其通过影响P-gpATP酶活性的体内研究比较少见。据临床实践观察发现，肝癌患者更易对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶产生耐药，通过建立BLAB/c小鼠肝癌多药耐药的模型，研究姜黄素联合FAP对P-gp ATP酶活性的影响，深入探讨MJ联合FAP对肝癌多药耐药的逆转作用及其机制。

参考文献：

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