虎耳草的生物活性与药理作用研究

摘要 虎耳草茎长而匍匐下垂，茎尖着生小株，犹如金线吊芙蓉，具有较好的观赏价值，可用于岩石园绿化，或盆栽供室内垂挂。同时，虎耳草还是我国传统的中草药，具有多种药用功能，如抑菌、抗氧化、诱导成纤维细胞凋亡和抑制肿瘤的增生等作用。文中详细描述了虎耳草的分布、生物学特性以及栽培等慨况、民间药方以及生物活性与药理作用，为虎耳草的生物活性研究和药用开发奠定了良好的基础。

关键词 虎耳草；有效成分；生物活性；药理作用

中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）17-05422-03

世界上存在虎耳草属植物大约有400余种，分布于北极、北温带和南美洲（安第斯山）；中国约有203种，南北均产，主产于西南、青海和甘肃等省区；云南约有100种，多分布在海拔3 000 m以上的高山岩石上及石缝间。其中常见的有：大虎耳草为卵心叶虎耳草的全草，主产于云南；黑虎耳草为黑虎耳草的花，生于海拔3 000～3 800 m的高山草甸或石隙，分布于甘肃、青海等地；聚叶虎耳草为聚叶虎耳草的全草，主要分布于陕西、甘肃和四川等地；华中虎耳草为齿瓣虎耳草的全草，分布于湖北和四川等地；黑心虎耳草为黑蕊虎耳草的全草，分布于陕西、甘肃、青海、四川、云南和西藏等地；青藏虎耳草为青藏虎耳草的全草，分布于甘肃、青海和西藏等地；斑点虎耳草为斑点虎耳草的全草，分布于东北地区；爪虎耳草为爪瓣虎耳草的全草，分布于甘肃、云南、西藏等地。笔者对虎耳草的分布、生物学特性以及栽培等慨况、民间药方以及生物活性与药理作用进行综述，以期为虎耳草的生物活性研究和药用开发奠定基础。

1 资源概况

1.1 形态特征 虎耳草为虎耳草属的虎耳草全草，生于海拔400～4 500 m的林下、灌丛、草甸和阴湿岩石旁，长江流域、华南、西南、华东至陕西等省区都有分布；台湾也有栽培品。其冬天不枯萎，别名金丝荷叶、石荷叶、金线吊芙蓉、耳朵红、老虎耳、矮虎耳草、系系叶、耳聋草、猪耳草、石丹药、佛耳草、丝丝草、猫耳朵等；根细长；匍匐茎细长，红紫色，有时生出叶与不定根；叶基生，通常数片；叶柄长3～10 cm；叶片肉质，圆形或肾形，直径4～6 cm，有时较大，基部心形或平截，边缘有浅裂片和不规则的细锯齿，上面绿色，常有白色斑纹，下面紫色，两面被柔毛；花茎高25 cm，直立稍倾斜，有分枝；圆锥状花序，轴与分枝、花梗被腺毛及绒毛；苞片披针形，被柔毛；萼片卵形，先端尖，向外伸展；花多数，花瓣5，白色或粉红色下方2瓣特长，椭圆形披针形，长1.0～1.5 cm，宽2～3 mm，上方3瓣较小，卵形，基部有黄色斑点；雄蕊10，花丝棒状，比萼片长约1倍，花药紫红色；子房球形，花柱纤细，柱头细小；蒴果卵圆形，先端2深裂，呈喙状；花期5～8月，果期7～11月[1]。

1.2 生态学特性 虎耳草适宜在阴凉、荫蔽和凉爽的环境中生长，忌高温。其起源于北温带[2]，是一种较耐寒的植物，低温来临时，代谢速率降低，处于休眠状态，可以很好的进行光合作用，当温度适宜时，光合能力快速恢复，盛夏高温季节生长停止出现休眠。因此在种植虎耳草时，夏季应及时拉网遮阴，喷水降温，避免高温对其的不利影响[3]，其生长高峰期为冬半年。其在50%透光率条件下，叶绿素含量较高，抗氧化酶活力最高，光饱和点最大[4]。在100%光照下和在20 ℃/16 ℃（12 h昼/12 h夜）适温下，有效成分含量如岩白菜素和没食子酸的含量最高，说明光照强度对虎耳草的生长起到了非常重要的作用[5]。虎耳草以中性偏酸，速效磷、钾含量高的黄壤土为宜，无论对虎耳草的根系发育、地上部分生长，还是对新植株的繁衍都有利；高氮、高有机质和中性偏碱的腐叶土次之。

1.3 栽培技术 虎耳草繁殖力强，自然资源贮量丰富[6]，现在大多用种子或分株繁殖。种子可在春季3、4月播种，撒播，覆土1～2 cm，经常保持土壤湿润，约2星期左右出苗。分株繁殖全年均可，选择根系发达，生长健壮的植株，高7～10 cm，由匍匐枝长出的幼苗剪下作为种苗，株行距17 cm×17 cm，浅栽，把须根压在土里；若在阴湿的石坎或石壁上栽培，可把苗栽在石缝里，用湿润的腐殖土把须根压紧，浇水。四季均可采收，将全草拔出，洗净，晾干[1]。

2 民间方药

我国古代对于虎耳草的研究也众说纷纭，古书记载其治痔疾肿毒，用少些晒干入马子（便桶）内烧熏；治瘟疫，擂酒服；治耳内暴热毒，红肿流脓疼痛，捶汁滴入耳，或加冰片消散而愈；喉闭无音，用以代茶；治吐血；清肺热；治咳嗽；疗风疹、丹毒；涂疮痈，冻疮，及毒虫刺伤；治肺痈吐臭脓；肝火，童子痨；祛湿消肿，凉血止血；治百日咳[7]。民间也记载了许多虎耳草的附方[1，7]（表1）。

3 主要活性成分与提取工艺

研究表明，虎耳草具有许多生物活性，是因为其中含有大量的黄酮类化合物，研究最多的为槲皮素、槲皮苷。此外其还含有一些有机酸、甾体类和多酚类化合物，如岩白菜素、原儿茶酸、琥珀酸、没食子酸、对-香豆酸、谷甾醇、山柰酚、胡萝卜苷、虎耳草素等具有较大药用价值的成分[8-9]。许多学者对虎耳草活性成分的分离和测定大多采用乙醇提取与色谱分析的方法。

3.1 乙醇等溶剂提取 大多运用浓度80%乙醇热提取回流，乙酸乙酯萃取，对乙酸乙酯萃取部分采用硅胶柱色谱和凝胶柱色谱等手段进行分离纯化。根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定，乙酸乙酯层分离得到没食子酸、槲皮素、岩白菜素、谷甾醇、槲皮素3鼠李糖苷、原儿茶酸、琥珀酸等10个化合物[10-11]。有些学者将乙酸乙酯萃取液减压蒸干，通过显色反应证明其中含有黄酮类化合物。采用可见分光光度法测定其全草中的总黄酮含量，得到的样品平均回收率值为102.66%[12]。在微波辅助提取工艺条件下，测出其中总黄酮含量11.30 mg，总多酚20.27 mg和多糖55.85 mg[13]。

3.2 高效液相色谱法（HPLC）分析 采用Lichrospher C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），无水甲醇1 g/L磷酸溶液为流动相，采用梯度洗脱程序，检测波长为270 nm，流速1 ml/min。分析得到虎耳草中含有没食子酸、原儿茶酸和虎耳草 素，其平均回收率分别为100.59%、98.72%和103.94%[14]。并且鉴别出虎耳 草中的岩白菜素，检测出可以作为虎耳草药材的植株，含水量要不超过12%，总灰分不高于20%，酸不溶性灰分不高于9%，醇溶性浸出物量不低于5%，方可作为药用[15]。还用此法检测出虎耳草不同部位岩白菜的含量有所差异，叶中岩白菜素的含量最高，根中岩白菜素含量相对较低[16]。

3.3 气相色谱-质谱联用技术（GCMS） 利用气相色谱质谱联用技术（GCMS），结合标准谱库，对虎耳草挥发性的成分进行了研究，共鉴定出58种成分，占挥发油成分总量的9.254 1%，相对百分含量较高的是丹皮酚45.974%、二叔丁对甲酚19.219%、正二十五烷1.687%、正二十二烷1.661%和正二十一烷1.485%等[17]。

4 药理作用

虎耳草药用价值很高，是民间常用中药材，被称为“家庭药箱”。虎耳草性微苦、辛、寒，可以治疗多种疾病。许多研究表明虎耳草提取物具有广泛的生物活性。

4.1 强心、利尿 离体蛙心滴加虎耳草压榨的鲜汁滤液或1 ∶1乙醇提取液0.01 ml，均显示一定强心作用。提取液去钙后对心脏仍有兴奋作用。该品强心作用较氯化钙发生慢，持续时间较长[1]。麻醉犬及清醒兔静脉注射虎耳草乙醇提取液1 ml/kg，呈明显利尿作用。将提取液中所含苷类破坏后，仍有一定利尿作用[1]。

4.2 抑菌 钮绪燕等开展了虎耳草杀菌活性的初步研究[18]，分别用石油醚、二氯甲烷、无水甲醇提取，测得其提取物对西瓜枯萎病菌、玉米小斑病菌和番茄早疫病菌的抑制率分别为22.2%、26.8%和55.3%。这些研究充分证明了虎耳草提取物具有明显的抑制细菌和真菌的活性。刘世旺等以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为试验菌株，通过虎耳草乙醇提取物不同浓度下细菌生长曲线，来研究虎耳草的抑菌作用[19]。结果表明，较低浓度的提取物对摇床培养的金黄色葡萄球菌生长具有较强的抑制作用；各浓度提取物对摇床培养的大肠杆菌生长均表现为抑制作用。

4.3 抗氧化 崔玮等证明了虎耳草能够通过降解O2和H2O2为无毒性的H2O和O2，去除氧自由基和过氧化脂质对组织的损伤，起到抗衰老作用[20]。虎耳草中含有的山柰酚、岩白菜素、槲皮素、槲皮苷、没食子酸、原儿茶酸和谷甾醇等物质，都具有不同程度的抗氧化作用[21]，说明其抗氧化成分的含量很高。潘国庆等以蓖齿虎耳草为研究对象，考察了其对部分食用油脂的抗氧化作用[22]。结果表明，藏药蓖齿虎耳草乙醇提取物对菜籽油、花椒油、芝麻油均有一定的抗氧化作用，其效果与VC相当，对菜籽油和芝麻油效果尤为明显。

4.4 抑制肿瘤增生 黄酮类化合物具有抗胰腺癌作用[27]。虎耳草含有的槲皮素是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物，能明显抑制癌细胞DNA合成[28]，近年来对它的研究，发现其具有一定的抗癌作用，对人卵巢细胞癌、乳腺细胞癌、自血病细胞和胃肠道肿瘤细胞均有增殖抑制作用[29-32]。周欣等提取虎耳草不同部位，对体外培养的PC3细胞的增殖抑制研究，发现乙醇提取-乙酸乙酯萃取部位对PC3细胞的抑制作用较明显[33]。丁家欣等从虎耳草中提取不同的有效部位，利用流式细胞仪观察对体外培养的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响[34]。结果表明，不同pH值的虎耳草乙酸乙酯不同萃取物对前列腺癌细胞均有明显诱导凋亡的作用，对前列腺癌细胞的生长也有明显的抑制作用。居龙涛等用雌二醇和孕酮制造大鼠乳腺增生模型，由治疗组的效果显示，虎耳草具有调节体内性激素的动态平衡[35]；并对乳腺增生病大鼠的乳腺组织有明显的治疗作用。

4.5 抗雌雄性激素 中国中医科学院中心实验室证明，虎耳草主要活性成分中原儿茶酸、没食子酸、琥珀酸具有抗雌雄性激素作用，但无性激素样作用，从而影响前列腺内的二氢睾丸酮、各种生长因子及生长抑制因子，来调控前列腺细胞的生长与细胞凋亡，促使增生的前列腺萎缩，降低国际前列腺症状评分（IPSS），从而达到治疗目的[23]。

4.6 诱导成纤维细胞凋亡 张立石等将虎耳草水煮醇沉后的浓缩液，用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后冷置过滤，滤液再浓缩，进行聚酰胺柱层析，制备提取物作用于培养好的小鼠成纤维细胞，流式细胞仪观察细胞凋亡状况，各提取物均对小鼠成纤维细胞有抑制作用，提示中药虎耳草中某些成分经过筛选，可作为细胞凋亡诱导剂，用于前列腺增生的治疗[24]。

4.7 护肝 左国营等研究了黑蕊虎耳草中岩白菜素衍生物11氧-岩白菜素，该化合物对丙型肝炎丝氨酸蛋白具有抑制活性[25]。

4.8 抑制神经病理性疼痛 鞘内注射100 mg/kg虎耳草素时，可以明显地抑制由于脊神经损伤引起的MWT下降以及TWL的延长，且这种抑制效应与虎耳草素的剂量相关，呈剂量依赖关系，结论鞘内注射虎耳草素具有明显的抗神经病理性疼痛作用[26]。

4.9 毒性 将家兔以35 ml/kg鲜汁灌胃，24 h后未见任何不良反应；第2天重复给予60 ml/kg，观察3 d，也未见任何不良反应[1]。

5 应用实例

用100 ml鲜虎耳草捣汁，纱布过滤加75%乙醇20 ml制成滴耳，治疗急慢性中耳炎，治愈率为93.56%[36]。取虎耳草鲜叶捣汁，纱布过滤，加适量冰片，用3%双氧水洗涤外耳道，将浓汁清除干净，然后取虎耳草叶滴耳，每次1～2滴，每日3次。治疗化脓性中耳炎31例，急性25例，平均3 d治愈，慢性6例平均7 d治愈[11]。陈元等用虎耳草15 g煎水内服，1日3次，忌食鱼、虾腥味之品。结合虎耳草100 g煎水泡洗全身，1日1剂，对治疗麻疹有很好的疗效[37]。

居龙涛等采用虎耳草针剂，经会阴部前列腺内注射，每侧2 ml，5～7 d注射1次，连续10次为1个疗程[38]。8例采用虎耳草栓剂，每天1次，肛门内给药。合并尿路感染者先用抗生素治疗，合并急性尿潴留者应先导尿处理，对有凝血功能障碍的，禁忌经会阴部前列腺内注射给药。治愈合并急性尿潴留4例，前列腺炎3例，前列腺结石l例，尿路感染2例，具有很高的临床价值。居龙涛用虎耳草针剂2 ml肌注，每天1次；或口服虎耳草片剂，1次2片（含生药4 g/片），每天3次[39]；或同时使用虎耳草片剂和针剂；连续3个月为1疗程，通常治疗1～2疗程。结果显示虎耳草制剂治疗甲状腺良性结节显效率达54.76%，有效率达33.34%，总有效率达88.10%。除肌肉注射引起部分病人局部不适，其他无明显的毒副作用。其中有13例4年以上未复发。

取生虎耳草120 g，猪耳1只（约400 g），加水熬至熟烂，吃肉喝汤，早晚各1次，此方对中耳炎患者，特别是化脓性中耳炎患者有良效，且见效快，1剂可愈[40]。贵州名医石恩骏根据多年的观察和研究，以虎耳草制成粗末，对各种急、慢性肾炎、肾病综合症有较理想的效果[41]。

6 小结与展望

随着人类社会的发展，生活水平的提高。一些肥胖病、心脑血管疾病、肿瘤等成为医学界治愈的难题。尤其癌症是对人类健康和生命威胁最大的疾病。近年来其发病率持续上升，发病率、病死率均居我国疾病首位。尽管新型化疗药物和治疗手段层出不穷，但整体的疗效并不满意，化疗药物对人体的免疫系统和骨髓等具有严重毒、副反应。所以，探索快速治疗癌症，减轻病患痛苦，减轻其副反应，提高生活质量，同时又能提高宿主免疫功能的药物，是目前疾病学研究的难点、热点之一。

而中药副反应少，治疗彻底，成为现在临床研究的热门。大量研究已证实，黄酮类化合物在肺癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌等的治疗和预防中均相当重要，逐渐成为研究热点。研究表明，其主要是通过阻滞癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡、抑制蛋白激酶活性、抑制信号转导途径等机制发挥抗癌效应[42-43]。我国是一个具有丰富中草药资源的国家，虎耳草中槲皮素等黄酮类化合物含量很高，对治疗癌症有一定的潜能。因此，要对虎耳草的成分和分离方法进行系统分析与探索，利用癌症动物模型进行体内试验和新药的开发，为提高癌症的治疗水平和生存质量具有重要的意义。

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