免疫透射比浊法检测孕妇和儿童血清降钙素原临床参考区间的调查

检查，检查结果均为健康的孕妇424名，年龄18～41岁。纳入标准：无既往病史，x线胸片、B超、心电图、肝肾糖脂等检查均正常;排除标准：体温高于37℃以上者除外，近1个月有服药史者除外，既往发现患有肝脏、血液、心脏疾病者除外。

1.1.2儿童组：选择2017年3月至2018年9月于本院儿保科接受常规体检且证实为健康的儿童、青少年513名作为研究对象。年龄4～18岁，纳入标准：营养状况良好，体重指数和其他身体指标在正常范围内1月内无感染、发热和用药的情况;三大常规检测结果均正常;肝肾功能检查结果均正常。排除标准：有肝脏疾病、肾脏疾病、心脏疾病及糖尿病等重大疾病者除外。

1.2仪器与试剂：贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪。宁波美康降钙素原免疫透射比浊试剂及配套校准品和质控品。参数设置按照试剂所带说明书执行，检测系统的性能评价符合临床的使用要求。使用美康校正品对项目进行校正。使用美康质控品完成室内质控，质控结果均在控;实验相关人员，工作前统一培训。

1.3检测方法：将接受检查的孕妇按照年龄和孕周进行分组，年龄分为<30岁，≥30岁;孕周分为孕早期（1～13周），孕中期（14～27周），孕晚期（28～40周）;将受检儿童按性别及年龄进行分组，分为4～12岁女，13～18岁女，4～12岁男，13～18岁男。全部抽取清晨空腹静脉血3-5 ml，2h内分离血清，排除溶血及脂血标本，24 h内完成检测PCT水平检测。判断分组后组间有无统计学意义并计算正常参考区间，将获得的参考区间与厂家试剂盒提供的参考区间进行阳性率比较，同时按照行业标准《WS/T 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》文件的推荐方法对本研究建立的PCT参考区间进行验证。

1.4统计学分析：依据《WST 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》对有关检验项目的参考值和参考区间设定的导则要求，使用SPSS For Windows 22.0统计软件进行统计学分析。先采用IFCC推荐的Dixon法判断剔除离群值，结果采用均数±标准差（x±s）表示。各组检测数据检定是否正态分布，数据是正态分布，或数据经转换后成正态分布，参考区间采用x±1.96s描述，两组间数据比较采用独立样本t检验，多组间数据比较采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2.实验结果

2.1本次研究共两组，孕妇组共计424人，无疑似离群值;正态分布检定，具备正态分布特征 P>0.05，见图1。儿童组共计513人，疑似离群值1个，为0.63作数据离群判断，此结果和其相邻值的差D与所有数据的全距R相除，D/R=0.429，大于判定标准1/3，确定为离群值故剔一个离群值后有可用标本512人。正态分布检定，具备正态分布特征， P>0.05。见图2。

2.2不同分组进行比较：孕妇组分为<30岁年龄段和≥30岁年龄段，结果显示血清PCT含量，P=0.487>0.05无显著性差别，见表2;儿童组分为4～12岁男、女年龄段和13～18岁男、女年龄段，结果显示血清PCT含量，P=0.077>0.05无显著性差别，见表3;孕妇组不同孕周进行比较，为孕早期（1～13周）、孕中期（14～27周）、孕晚期（28～40周）比較，P=0.429>0.05，血清PCT含量无显著性差别，见表4。

2.3根据《WST 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》，各组检测数据检定是正态分布，参考区间采用x±1.96s描述。对比发现，不同年龄的儿童和孕妇，不同孕周的孕妇血清PCT含量不显著性差异，故根据年龄取较大范围的置信区间。并且PCT低值无临床意义，故建立本检测系统正常孕妇的PCT参考区间为0～0.30 ng/mL，建立本检测系统正常儿童和青少年的PCT参考区间为0～0.40 ng/mL，见表5.

2.4不同参考区间阳性率比较 见表6，本次研究的参考区间与厂家提供的参考区间存在差异，若以厂家提供的上限（0.5ng/mL）为标准，936名正常研究对象无一例为异常，阳性率为0。按照本研究得出的上限，孕妇0～0.30 ng/mL，正常儿童和青少年0～0.40 ng/mL，阳性26例，阳性率为2.78%，明显高于厂家提供的参考范围。可见厂家提供的参考区间不适合本地区，容易造成假阴性，给临床诊疗造成误区，相比之下本次研究获得的参考区间更能代表本地区使用免疫比浊法检测PCT的正常检测水平。

3.参考区间的验证 按照行业标准《WS/T 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》文件的推荐方法对本研究建立的PCT参考区间进行验证。选择2018年10月在我院妇产科体检的20名健康孕妇和儿保科健康体检的20名健康儿童，所有标本均符合验证标准，检测PCT浓度。将参考个体PCT结果与需要验证的区间进行比较，数据不超出待验证的区间小于2例，则表示通过验证;验证结果显示：20例健康孕妇的PCT结果在参考区间之内;20例健康儿童的PCT结果也在参考区间之内，故本次实验所建立的参考区间经过验证可以使用。

3讨论：

PCT在分子结构上有多个结合位点，这些糖蛋白结合为点是由细菌等病原体诱导分泌的，与细胞壁的代谢产物所介导的炎症损伤有密切关系[6]。近年来，PCT已被临床公认是敏感的炎性反应物之一，可以明确判断感染性疾病，特别是在细菌感染性疾病的早期诊断、治疗及疗效评价等方面，具有重要的临床应用价值。随着检测技术的发展，有多种检测PCT的方法[7]，放射免疫法、胶体金法，免疫发光法等方法都存在各自的优缺点。免疫比浊法相对方法简便、快捷，成本较低，可以适用于各种生化分析仪，对各项性能指标的验证和评价，均能满足临床的要求，具有良好的发展前景[8]。

有研究认为，参考区间应用应考虑主要三方面因素，即参考区间的适用性、检测的方法学以及人群特点[9]。同一标本采用不同的方法得到的测定值可能不同，参考区间也可能不同。生物的固有变异性会影响检测结果，所以生物参考区间也并非固定不变的范围。CLSI EP28-A3C文件指出“利用健康参考个体样本测定和统计结果得到的生物参考区间是最可靠的”，并制定了自建生物参考区间的有效方法。目前，国内实验室的生物参考区间多由直接引用来确定本实验室的参考区间。有研究显示[10]，采用电化学发光免疫分析技术建立的不同妊娠时期血清PCT检测水平的参考区间供临床和实验室人员参考。但关于免疫透射比浊法检测血清PCT建立孕妇和儿童的参考区间，尚无研究报道。本研究依据《WST 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》对有关检验项目的参考值和参考区间设定的导则要求，对兰州市（海拔1500 m）的424名健康孕妇和512名健康儿童和青少年进行血清PCT免疫透射比浊法参考值范围的调查研究。结果显示空腹静脉血清PCT含量在孕妇30岁上下年龄段比较水平无统计学意义;孕早期、孕中期、孕晚期PCT结果比较也没有统计学差异。妇产科感染疾病具有病程长、易反复的特点，血清PCT检测在诊断妇科感染性疾病中的应用价值较高[11]。早期诊断疾病;及时有效的治疗;是治疗妇科感染性疾病的关键环节。患者体内血清PCT水平与炎症程度呈正相关，临床可以根据血清PCT的高低水平判断炎症的严重程度和评估临床疗效[12]。有研究显示，妊娠是子宫内膜上胎盘诱导的炎症过程，而分娩则能激发分娩相关的炎症瀑布，孕妇在围产期血清PCT会显著升高[13]，因此，妊娠期PCT的正常水平对分娩感染的判定尤为重要。本次研究对健康孕妇血清PCT免疫透射法参考范围的研究，有助与为临床判定填补了这方面的空白，有助于为临床相关研究提供帮助，但本次研究缺乏对围产期产妇血清PCT的检测，将在今后的工作研究中继续关注，以提供更为全面的参考价值。

感染性疾病在儿科疾病中最为常见、多发。儿童身体的各器官处于发育阶段，抵抗力低，免疫力差，容易被各种病原体的入侵。并且儿童在感染的早期普遍没有特异性的临床症状，对感染早期诊断十分困难。在临床工作中，支持儿科早期感染的诊断和治疗十分重要，需要选择特异性好，灵敏度高的指标进行检测。在儿科监测细菌性感染显示，正常儿童的降钙素原检测结果明显低与感染的患儿，且检测的降钙素原越多，患儿的感染程度越高。由于PCT升高促进下游细胞炎症因子IL-6、IL-10等的释放，促进巨噬细胞、单核细胞等对于肺泡上皮组织、泌尿系统等的损伤，加剧患儿感染脓毒血症和败血症等症状[14]。高浓度PCT反映患儿病情严重，预后不好，对于高浓度的感染病例，临床需要高度重视[15]。敏感的检验项目，合理的参考区间，对儿科疾病的诊断、治疗、预后和健康评估都起着十分重要的作用。但因儿童成长的自身特点，如生长发育快、不同发育阶段检验指标的参考区间存在明显差异等，使得儿童检验指标参考区间的制定十分困难[16]。本次研究血清PCT含量在健康儿童和青少年中不同性别年龄在12岁年龄上下没有显著性差异，本项研究填补了儿童检验指标的部分空缺，为更大范围地建立儿童生物参考区间奠定了一定的基础。研究得出结论免疫透射比浊法在健康孕妇的PCT参考区间为0～0.30 ng/mL;在4岁以上儿童和青少年的PCT参考区间为0～0.40ng/mL，并通过比较和验证适合使用，明确了我院就诊人群采用免疫透射比浊法在自动生化分析仪检测系统中的参考范围。临床应用此参考值范围，亦逐渐被临床医生所认可。PCT对抗菌药物治疗有至关重要的指导意义，孕妇和儿童作为特殊人群，需要根据不同检测项目建立相应的生物参考区间，本项研究填补了部分空缺，为更大范围地建立孕妇和儿童的生物参考区间奠定了一定的基础，助力精准医学的发展。

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